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肉毒堿棕櫚酰轉移酶(CPT1)測試盒

簡要描述:

肉毒堿棕櫚酰轉移酶(CPT1)測試盒是存在于線粒體內膜的一類酰基轉移酶。可逆地催化從酰基輔酶將酰基轉移至L-肉毒堿的反應,在轉運脂肪酸通過線粒體內膜的過程中起重要作用。

更新時間:2024-09-02;廠商性質:經銷商;覽量:2014

商品詳情:
肉毒堿棕櫚酰轉移酶(CPT1)測試盒正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

肉毒堿棕櫚酰轉移酶是存在于線粒體內膜的一類酰基轉移酶。可逆地催化從酰基輔酶將酰基轉移至L-肉毒堿的反應,在轉運脂肪酸通過線粒體內膜的過程中起重要作用。

貨號

規格

檢測方法

YSH3387

100管/96樣

微量法

YSH3387-1

50管/48樣

可見分光光度法

測定原理:

基于肉堿和脂酰輔酶在丙二酰輔酶存在與否的條件下,通過肉堿脂酰轉移酶(CPT-I)的作用,產生脂酰肉堿,并釋放出巰基輔酶(COA-SH),與Ellman試劑DN-TB反應后,產生黃色的TNB。通過其吸收峰值得變化(412nm),來定量分析CPT-1的活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水
樣品中AA提取:

1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。

2.細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3.血清等液體:直接檢測。

計算公式如下:

1、血清(漿)LAP活力的計算:

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。

注意事項:

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。

2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。

4.檢出限為100μmol/L。

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直鏈淀粉比色法檢測試劑盒 微量法100管/96樣

直鏈淀粉比色法檢測試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣

支鏈淀粉比色法檢測試劑盒 微量法100管/96樣

支鏈淀粉比色法檢測試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣

α比色法檢測試劑盒 微量法 100管/48樣

α比色法檢測試劑盒 可見分光光度法 50管/24樣

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